1.該模型制備比較成熟，國內(nèi)外都有此模型，構建和評價指標一致，所以該模型應用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學應用價值。

1、1. SIVmac251靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結果

8只SIVmac251靜脈感染恒河猴均在感染后7d檢出病毒載量陽性，之后迅速上升，在感染后14d達到高峰，峰值在107至108copies/mL之間，隨后迅速下降（圖1）。SIVmac251靜脈感染后42d到140d感染猴的血漿載量比較穩(wěn)定，1、2、3、4、9、11六只感染猴血漿病毒載量維持在105至107copies/mL之間；10號猴血漿病毒載量下降至105copies/mL以下；12號猴血漿病毒載量一直維持在較高水平，即107copies/mL以上。

圖1 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血病毒載量結果

Fig.1 Theviremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

1、 2. SIVmac251靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結果

8只感染猴CD4+/CD8+的比例在SIVmac251靜脈感染后持續(xù)下降，均于感染后14d出現(xiàn)倒置。2、4、10、11、12猴在感染后期一直維持在1以下的水平，其中，2、10、11三只猴維持在0.5上下波動。1、3、9三只感染猴在SIVmac251靜脈感染后期CD4+/CD8+比值有些許反彈，在1.0上下波動。（圖2）。

圖2 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SIVmac251

3.SIVmac251靜脈感染恒河猴CD4+ T細胞絕對數(shù)

8只感染猴CD4+細胞絕對數(shù)在SIVmac251靜脈感染后迅速下降，隨后發(fā)生回彈，在感染后56d下降至最低，之后維持在穩(wěn)定水平（圖3）。12號猴的CD4+細胞絕對數(shù)在感染后231天下降至50個/μL，出現(xiàn)艾滋病癥狀，繼而死亡。4號猴的CD4+細胞絕對數(shù)在感染后259天下降至100個/μL以下；3號猴的CD4+細胞絕對數(shù)一直在800-1000個/μL上下浮動。

圖3 SIVmac251靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+T淋巴細胞絕對數(shù)

Fig.3 The CD4+T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infectedintravenously with SIVmac251

1、 實驗用病毒：感染毒株為SIVmac251中國恒河猴細胞適應株，中國恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度為5×103 TCID50/mL。

2、 感染動物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實驗前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結果為陰性。所有感染動物必須在ABSL-3室中進行。

3、 感染方法：將1 mL含有50 TCID50 的SIVmac251病毒經(jīng)后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SIVmac251靜脈感染猴樣品采集和指標測定：在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、84、112、140、168、196、231、259、287天采集EDTA抗凝血4mL，分別測定血常規(guī)、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細胞絕對數(shù)。

5、 SIVmac251靜脈感染猴血漿病毒載量的測定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實時熒光定量RT-PCR方法測定血漿病毒載量。

6、 SIVmac251靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對數(shù)測定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標記EDTA抗凝全血淋巴細胞，流式細胞儀測定CD4+/CD8+比值，并根據(jù)血常規(guī)結果，計算出CD4+T細胞絕對數(shù)。

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human ImmunodeficiencyVirus, HIV）引起，以全身免疫系統(tǒng)嚴重損害為特征的傳染性疾病，是20世紀危害人類健康和生命最嚴重的病毒性疾病之一。自美國CDC報道首例艾滋病后，到20世紀80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬人，2014年新增感染者200萬，2014年因艾滋病死亡120萬人。艾滋病在1985年傳入我國，截至2015年5月31日，歷年累計報告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關注的公共衛(wèi)生和社會熱點問題，艾滋病的預防與治療也成為當代生物醫(yī)學研究的前沿熱點之一。

艾滋病動物模型簡介

艾滋病發(fā)病機制研、藥物和疫苗的保護性研究及評價等方面在很大程度上依賴理想的動物模型。人們發(fā)現(xiàn)HIV以后，用HIV感染過多種動物，但由于種種原因，結果并不理想。研究發(fā)現(xiàn)猴免疫缺陷病毒(SIV)感染實驗用猴的模型效果比較理想，表現(xiàn)為和AIDS的臨床表征，發(fā)病過程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物學特性也較其他動物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應用。

SIV是猴獲得性免疫缺陷綜合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，為典型的C型病毒粒子，基因組長度大約為9.2kb，基因組成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二個LTR以及同HIV類似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列順序同HIV完全一樣。目前國內(nèi)外對SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因為這兩個病毒株能在多種獼猴屬動物身上引發(fā)致死性免疫缺陷綜合征，同時伴有CD4+淋巴細胞下降，繼發(fā)機會性感染病毒性腦膜腦病。這些都與人類AIDS類似。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經(jīng)血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動物模型的制備首先要考慮其實際應用價值，最好的動物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為充分模擬靜脈注射吸毒人群的感染方式，通過靜脈途徑，病毒直接感染血液中的靶細胞，從而制備靜脈途徑艾滋病恒河猴感染模型。